DESENVOLVIMENTO DE MÉTODO DE UPLC-ESI-MS/MS PARA QUANTIFICAR CORILAGINA E GERANIINA EM EXTRATO E FRAÇÕES DE CASCAS DE Caryocar brasiliense (PEQUI) COM POTENCIAL ATIVIDADE ANTIDIABÉTICA

Resumo

Caryocar brasiliense Camb. (Caryocaraceae) é uma espécie arbórea conhecida como pequizeiro, cujos frutos são consumidos na alimentação e utilizados tradicionalmente como anti-inflamatório. O extrativismo do pequi resulta na produção anual de toneladas de cascas do fruto, descartadas sem qualquer aproveitamento. Nosso grupo de pesquisa demonstrou que o extrato etanólico de cascas do fruto de C. brasiliense e frações derivadas contêm os elagitaninos corilagina e geraniina. A atividade hipoglicêmica desses derivados foi comprovada por ensaios in vitro de inibição das enzimas α-amilase e α-glicosidase e pelo teste in vivo de tolerância ao amido¹. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo desenvolver um método de UPLC-ESI-MS/MS para quantificar corilagina e geraniina no extrato etanólico de cascas do pequi (EEC) e nas frações derivadas deste (fração em acetato de etila FAE e fração enriquecida em taninos F16C). A quantificação foi realizada pelo método de calibração pelo padrão externo, utilizando os elagitaninos isolados corilagina e geraniina como substâncias de referência. Foram construídas curvas analíticas em triplicata a partir de soluções metanólicas de corilagina e geraniina (2, 50, 100, 150 e 200 μg/mL). As análises foram realizadas em sistema de cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a espectrômetro de massas com ionização por eletrospray (UPLC-ESI-MS/MS) em uma coluna HSS C18 (1,8 µm, 50 x 2,1 mm), eluição em gradiente de água e acetonitrila acidificados com 0,1% (v/v) de ácido fórmico, fluxo 0,3 mL/min e temperatura 40 °C. Os tempos de retenção da corilagina e geraniina foram de 3,2 e 4,3 minutos, respectivamente. O método desenvolvido utilizou aquisição por Monitoramento de Reações Múltiplas (MRM) e ionização no modo negativo, e foi baseado em duas transições, específica e confirmatória, para quantificação da corilagina (m/z 633→301 Da e m/z 633→275 Da; voltagem do cone, 60 V; energia de colisão, 38/38V) e geraniina (m/z 951→301 Da e m/z 951→273 Da; voltagem do cone, 54 V; energia de colisão, 46/48V). O método analítico apresentou boa linearidade (r² > 0,999) e desvio padrão relativo (DPR) < 8%, entre as injeções. Os teores percentuais (m/m; média ± DP, n=3) de corilagina e geraniina nas amostras foram, respectivamente, de 0,24 ± 0,01% e 1,47 ± 0,06% para EEC, 0,86 ± 0,02% e 3,83 ± 0,13% para FAE, e 2,07 ± 0,18% e 7,17 ± 0,40% para F16C. Os resultados obtidos demonstram o potencial das cascas do pequi, um subproduto do extrativismo do pequi, para o desenvolvimento de alimentos funcionais com propriedades antidiabéticas.